用于靶向捕獲測(cè)序的鏈霉親和素磁珠
高通量測(cè)序（或新一代測(cè)序，Next Generation Sequencing, NGS）是對(duì)傳統(tǒng)Sanger測(cè)序的革命性變革，解決了一代測(cè)序一次只能測(cè)定一條序列的限制，一次運(yùn)行即可同時(shí)得到幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸序列信息，但這些測(cè)序數(shù)據(jù)分析的復(fù)雜程度大大增加了科研人員的工作量，且隨著測(cè)序深度的增加，測(cè)序成本也日益增加?；诟咄繙y(cè)序技術(shù)的靶向捕獲測(cè)序可以針對(duì)目標(biāo)基因組區(qū)域進(jìn)行分離、富集和測(cè)序，檢測(cè)靈敏度高且數(shù)據(jù)分析難度低，在精準(zhǔn)醫(yī)療的時(shí)代，發(fā)揮著越來(lái)越大的作用。
文庫(kù)構(gòu)建是靶向捕獲測(cè)序獲得有效結(jié)果的基礎(chǔ)和關(guān)鍵，目標(biāo)區(qū)域捕獲又是影響文庫(kù)構(gòu)建質(zhì)量的關(guān)鍵。液相雜交捕獲是靶向捕獲測(cè)序中常用的目標(biāo)區(qū)域捕獲方法之一，在該技術(shù)中標(biāo)記生物素的探針與目標(biāo)區(qū)域雜交后，通過(guò)與磁珠表面包被的鏈霉親和素結(jié)合實(shí)現(xiàn)目標(biāo)區(qū)域的捕獲，隨后經(jīng)變性將探針與目標(biāo)區(qū)域分開，通過(guò)磁分離去除結(jié)合在磁珠表面的空探針后，即可完成目標(biāo)區(qū)域的捕獲。鏈霉親和素磁珠作為液相雜交捕獲的核心原料之一，其品質(zhì)的優(yōu)劣直接影響文庫(kù)構(gòu)建的質(zhì)量，進(jìn)而影響測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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圖1. Agilent SureSelect液相雜交捕獲流程
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目前進(jìn)口磁珠如Dynabeads、JSR及Merk的鏈霉親和素磁珠仍然在靶向捕獲測(cè)序中占有較大份額，但隨著測(cè)序成本降低的需求及在國(guó)家大力發(fā)展自主核心產(chǎn)品的號(hào)召下，國(guó)內(nèi)也出現(xiàn)了一批優(yōu)秀的磁珠微球生產(chǎn)廠家，有望實(shí)現(xiàn)進(jìn)口產(chǎn)品替代。
MagBeads?微米磁珠系列是東納生物專家團(tuán)隊(duì)經(jīng)多年研發(fā)精心打造、具有高水平質(zhì)量的明星產(chǎn)品。微米磁珠采用經(jīng)典的核殼結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)制造，內(nèi)核為聚合物微球，外層為磁性物質(zhì)，最外層采用特殊聚合物修飾，具有尺寸分布均一、表面負(fù)載量高、磁響應(yīng)時(shí)間短、分散穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，可以快速、高效地從樣本中分離出待測(cè)物，極大地提高檢測(cè)效率。
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圖2. MagBeads?微米磁珠系列示意圖
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MagBeads?鏈霉親和素磁珠通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)技術(shù)將鏈霉親和素固定在磁珠表面，可用生物素化核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的偶聯(lián)。目前此款磁珠已應(yīng)用在化學(xué)發(fā)光及靶向捕獲測(cè)序中，并獲得了一批穩(wěn)定的客戶，期待有更多的客戶試用并采用東納生物的鏈霉親和素磁珠。
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(a)
(b)
圖3.（a）（b）為不同標(biāo)尺下MagBeads?鏈霉親和素磁珠掃描電鏡圖
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MagBeads?鏈霉親和素磁珠性能：
??磁珠粒徑為1 μm，且尺寸均一、表面基團(tuán)分布均勻，可保證雜交捕獲過(guò)程的一致性，使文庫(kù)更加標(biāo)準(zhǔn)化；
??磁珠表面修飾親水性多聚物分子，并共價(jià)偶聯(lián)了多層鏈霉親和素，使磁珠表面被鏈霉親和素致密包裹，防止磁顆粒泄露并極大程度降低了非特異性吸附，保證雜交捕獲的特異性；
??磁珠表面具有顆粒狀粗糙度，比表面積高，同時(shí)極高的鏈霉親和素載量，可保證對(duì)標(biāo)記生物素的探針具有較高的吸附容量；
??磁珠具有良好的懸浮性，在pH3.0-9.0的環(huán)境中可保持穩(wěn)定，滿足雜交捕獲過(guò)程中自動(dòng)化高通量的要求；
??磁珠具有超順磁性，磁含量高且磁響應(yīng)速度快，可保證捕獲結(jié)束后，快速?gòu)氐兹コ龜y帶空探針的鏈霉親和素磁珠；
??磁珠產(chǎn)量穩(wěn)定、批間可重復(fù)性高，可保證雜交捕獲文庫(kù)構(gòu)建的穩(wěn)定性。
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