MagBeads?Oligo(dT)磁珠
【產品名稱】MagBeads?Oligo(dT)磁珠
【英文名稱】MagBeads?Oligo(dT) Magnetic Beads
【訂貨信息】
| 貨號 | 產品名稱 | 表面基團 | 規格 | 溶劑 | 濃度 |
MB1102-18a | MagBeads?Oligo(dT)磁珠 | Oligo(dT)18 | 1/5/10 mL | 保存液 | 5 mg/mL |
MB1102-18b |
MB1102-25a | Oligo(dT)25 |
MB1102-25b |
【成 ?分】Oligo(dT)磁珠分散在保存液中
【簡 ?介】
東納生物 MagBeads?Oligo(dT)磁珠具有合適的Oligo(dT)載量，尺寸約為1 μm，分散性好，具有較高的磁含量，磁響應速度快。通過磁珠表面的Oligo dT與mRNA尾部Ploy A之間互補配對，可以高效地從真核生物總RNA或直接從動植物組織、細胞中快速分離出完整、高純度的mRNA。提取的mRNA可用于分子生物學的各種下游實驗中，如RT-PCR、cDNA文庫構建、Northern Blot分析、引物延伸、基因表達分析等。
【產品信息】
產品信息 | MB1102-18a | MB1102-18b | MB1102-25a | MB1102-25b |
Oligo(dT)載量 | ＞500 pmol / mg磁珠 |
濃度 | 5 mg/mL |
粒徑 | 約1.0 μm |
磁含量 | 約35%-45% |
保存溶液 | TE，含0.1%BSA和0.01%P300作為防腐劑 |
保存條件 | 密封，2-8℃保存，禁止冷凍，使用前請充分混勻 |
包裝 | 塑料瓶 |
【操作步驟】
1. 準備緩沖溶液和材料
1.1 緩沖液配制：用戶可根據需要自行調整緩沖液配方（所有試劑需要使用DEPC處理的水配制）
溶液名稱 | 溶液配方 |
結合緩沖液 | 100 mM Tris-HCl,pH7.5 500 mM LiCl 10 mM EDTA,pH8 1%LiDS 5?mM dithiothreitol |
洗滌緩沖液A | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5
0.15 M LiCl
1 mM EDTA
0.1% LiDS |
洗滌緩沖液B | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5
0.15 M LiCl
1 mM EDTA |
洗脫液 | 10 mM Tris-HCl pH 7.5 |
注：所有試劑使用時平衡至室溫，如有沉淀，可37℃預熱10 min。
1.2 RNase-free的1.5 mL離心管；
1.3 用于1.5 mL離心管的磁力架；
1.4 焦碳酸二乙酯（DEPC）水：向純化水中加入終濃度0.1%(V/V) 的DEPC，混勻后放置過夜，高壓滅菌。
1.5 水浴鍋；
1.6 渦旋振蕩器
1.7 旋轉混合儀或搖床
2.清洗Oligo(dT)磁珠
2.1 徹底重懸試劑瓶中的Oligo(dT)磁珠（搖床振蕩10 min或手動搖晃至充分混勻）。
2.2 將所需體積的Oligo(dT)磁珠轉移到離心管中，加入結合緩沖液，使磁珠濃度為0.4 mg/mL。
2.3 將離心管置于磁力架上1 min，棄上清。
???吸棄上清時，盡量吸凈管蓋及管底殘液，請勿吸入磁珠。
2.4 將離心管從磁力架上取下，加入與初始體積相同體積的結合緩沖液，留作下一步備用。
3.從總RNA中純化mRNA
3.1 將使用結合緩沖液洗滌并重懸的磁珠充分混勻后，取50 μL至離心管中。
3.2 樣品準備：用DEPC水將10 μg總RNA樣品的體積調整至50 μL，加入含50 μL磁珠的離心管中，移液器輕柔混勻。
3.3 樣品置于PCR儀，65℃ 5 min，25℃ 5 min，4℃ hold。
3.4 磁分離，去上清，使用200 μL洗滌緩沖液A洗滌結合mRNA 的磁珠，移液器輕柔混勻，磁分離，去上清。
注意點：
?完成清洗時務必清除所有洗滌緩沖液。
3.5 加入50 μL洗脫液，移液器輕柔混勻，將樣品置于置于PCR儀，80℃ 2 min，25℃ hold。
3.6 加入50 μL結合液，移液器輕柔混勻，室溫放置5 min；再磁分離，去上清。
3.7 加入200 μL洗滌液緩沖液A，移液器輕柔混勻，磁分離，去上清。
注意點：
?完成清洗時務必清除所有洗滌緩沖液。
3.8 加入200 μL洗滌液緩沖液B，移液器輕柔混勻，磁分離，去上清。重復此步驟兩次。
注意點：
?完成清洗時務必清除所有洗滌緩沖液。
3.9 從磁力架上取下離心管，加入10 μL DEPC水或洗脫液，重懸磁珠，80℃ 2 min。
3.10 迅速使用磁力架收集上清，并將上清液轉移至無RNase的離心管中，進行下游實驗。
【注意事項】
1.盡量減少RNA降解；使用RNA時，請始終佩戴手套以盡量減少RNase污染；所有用于mRNA 提取的buffer和耗材都應該是RNase-free。
2.為減少磁珠損失，每次磁分離時間應不少于1 min。
3.在洗滌過程中徹底重新懸磁珠/mRNA復合物，并在每一步中完全去除洗滌緩沖液，以防止LiDS和其他鹽攜帶到下游反應中。LiDS是酶促反應的強抑制劑。
4.如果純化后的rRNA 殘留量對下游應用過高，建議用新的磁珠進行第二輪純化mRNA。
5.本產品僅供研究使用。
【生產單位】
注：提供工業級批量產品，可直接聯系銷售客服。
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地址：南京市龍眠大道568 號，南京生命科技小鎮5號樓，電話：025-83475811
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