PLL@Fe2O3表面帶的多聚賴氨酸量或是比例是多少?

質(zhì)量比是PLL：Fe=0.2：1

2. 濃度

PEI@Fe3O4，PEG化氧化鐵，PLL@Fe2O3的鐵濃度是1mg/ml，

DMSA@Fe2O3，DMSA@Fe3O4和APTS@Fe2O3的鐵濃度是4mg/ml

OA@Fe3O4，檸檬酸鈉修飾的Fe3O4，納米銀漿按總質(zhì)量算

銀納米顆粒0.1mg/ml

金納米顆粒的OD值一般是5，金單質(zhì)的質(zhì)量0.05mg/ml(金質(zhì)量計(jì))。

3. 產(chǎn)品溶劑或產(chǎn)品成分

4. 顆粒稀釋是否可以用去離子水？

答：可以。

5.?產(chǎn)品如何滅菌？可以高溫或者其他手段？??

答：產(chǎn)品在出售前已經(jīng)用0.22微米的濾膜除過(guò)菌，無(wú)需再次除菌。另高溫會(huì)破壞產(chǎn)品性狀，不可高溫滅菌。

6.?產(chǎn)品保質(zhì)期多久？在使用過(guò)程或者存放久了發(fā)生產(chǎn)品聚集的問(wèn)題如何解決？

答：產(chǎn)品保質(zhì)期是12個(gè)月。在保質(zhì)期內(nèi)，產(chǎn)品一般是不會(huì)出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象的，若您買(mǎi)回的產(chǎn)品還未使用，也未添加任何試劑，又在保質(zhì)期內(nèi)，我們承諾免費(fèi)退換。

7. 磁性是多少？

答：70emu/g，我們產(chǎn)品的這個(gè)磁性強(qiáng)度還是比較大的，也是我們產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)之一。

8.?生物相容性好，用什么數(shù)據(jù)說(shuō)明呢？

答：做細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)，加入量后，看細(xì)胞有沒(méi)有死亡，要是沒(méi)有死亡，說(shuō)明相容性很好。

9.?產(chǎn)品濃縮，如果離心一般多少轉(zhuǎn)速合適？

答：穩(wěn)定的話1萬(wàn)30分鐘都不能完全離下來(lái)，不穩(wěn)定的話5000轉(zhuǎn)5分鐘就可以了。

10.?納米顆粒的飽和磁化強(qiáng)度是用什么檢測(cè)的？

答：振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)。

11.?3.5mg/mlMnZnFe2O4@OA中3.5mg/ml指什么？

答：3.5mg/ml就是Fe的含量。（OA是油酸）

12.?你們磁性納米顆粒的制作方法是什么？共沉淀？

答：目前我們的產(chǎn)品大部分是用共沉淀法制得的，用共沉淀法制得產(chǎn)品也是最穩(wěn)定的，申請(qǐng)的國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)也是用共沉淀法制得的，我們這有高溫?zé)峤夥ㄗ龅模荒芘砍僧a(chǎn)，所以價(jià)格比較貴。

13.?你們的磁性納米顆粒怎么實(shí)現(xiàn)靶向的作用呢?

答：抗體靶向，或者用磁鐵吸。

14.?你們?cè)谑裁磧x器上測(cè)粒徑分布的？

答：DLS是粒度電位分析儀（Malvern，ZETA?SIZER?，Nano?ZS90），電鏡尺寸通過(guò)“力度分布計(jì)算”軟件分析得到的。

DMSA@Fe3O4

1.?DMSA@Fe3O4的摩爾濃度是多少呢？是用原子吸收測(cè)試的嗎？

答：因?yàn)楫a(chǎn)品的4mg/ml是以Fe來(lái)計(jì)的，所以該產(chǎn)品的摩爾濃度是4/56=0.0714mol/L.產(chǎn)品濃度不是用原子吸收測(cè)試的，是用紫外可見(jiàn)光譜測(cè)試的，用鄰二氮菲顯色測(cè)試的。

2.?DMSA@Fe3O4怎么稀釋保存？

答：超純水稀釋，然后用0.1M的四甲基氫氧化銨溶液調(diào)pH到中性或稍偏堿性保存。

3.?DMSA@Fe3O4簡(jiǎn)介

答：顆粒外圍是二巰基丁二酸，羧基來(lái)自于二巰基丁二酸，最外層就是羧基，電鏡尺寸一般在10nm左右。一般注射活體都用這個(gè)，二巰基丁二酸就是指DMSA。水相的磁性納米顆粒就是DMSA@Fe3O4。

4.?小鼠MRI造影時(shí)的推薦用量（如DMSA@Fe3O4），不同腫瘤用量是否也會(huì)不同？

答：稍有不同，可根據(jù)具體情況做相應(yīng)調(diào)整，一般的推薦用量是100mg鐵每千克小鼠體重。

5.?DMS@Fe3O4表面包被的是什么？

答：顆粒是DMSA表面修飾的。

6.?有相應(yīng)的蛋白質(zhì)交聯(lián)試劑盒么？還是我們自己要摸索EDC+Solfo-NHS的用量？

答：可以用EDC/sulfo-NHS的方法偶聯(lián)，這個(gè)方法比較成熟，但是涉及到在納米顆粒偶聯(lián)的時(shí)候其實(shí)最主要的是要保持顆粒的穩(wěn)定性，顆粒的穩(wěn)定性與電荷有很大關(guān)系，所以用不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)進(jìn)行偶聯(lián)在反應(yīng)緩沖液pH上是不同的，所以我們沒(méi)辦法做出相應(yīng)的試劑盒。到時(shí)候我們會(huì)提供一個(gè)大概的偶聯(lián)步驟，里面有試劑、蛋白質(zhì)、偶聯(lián)劑的用量和緩沖液的信息等，基本您可以照著做，針對(duì)您的蛋白質(zhì)您還可以稍做一些調(diào)整，尤其是緩沖液的選擇。如果您實(shí)在不愿意做的話，也可以交給我們公司幫您做，公司也有定制化的業(yè)務(wù)，但需要另外收費(fèi)。

DMSA@Fe2O3

1. 羧基化Fe2O3磁性納米顆粒的水動(dòng)力尺寸？

答：40-70nm。

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PEI@Fe3O4

1.?PEI_Fe3O4能否進(jìn)入到細(xì)胞核?

答：不能進(jìn)入。

2.?貴公司用于RNA轉(zhuǎn)染的納米顆粒，其表面修飾的有機(jī)物是PEI嗎？有機(jī)物的含量是怎樣的呢？

答：我們公司的磁轉(zhuǎn)染納米材料是Fe3O4納米顆粒的核，表面用PEI修飾，PEI的量沒(méi)有做過(guò)具體分析，但表面電位較正，已經(jīng)可以證明PEI的成功修飾，如有必要后面可能會(huì)考慮做熱重等。

3.?貴公司用于RNA轉(zhuǎn)染的納米顆粒電鏡尺寸如何？在超純水中的表面電勢(shì)是怎樣的？

答：電鏡尺寸在10nm左右，最終產(chǎn)品分散在純水中，zeta電位高于30mV（測(cè)量值一般在40～50mV之間）。

4.?為了直觀驗(yàn)證RNA被轉(zhuǎn)入細(xì)胞，我想用熒光染料標(biāo)記RNA，再與納米粒子結(jié)合，結(jié)合后是否會(huì)導(dǎo)致熒光的淬滅？

答：我們?cè)?jīng)做過(guò)用熒光標(biāo)記納米顆粒的研究，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致熒光淬滅的現(xiàn)象，只要您注意避光操作，應(yīng)該不會(huì)產(chǎn)生影響。

5.?與RNA混合后，粒子會(huì)否團(tuán)聚？對(duì)轉(zhuǎn)染的效率影響如何？

答：與RNA混合后是否團(tuán)聚主要與電荷有關(guān)，當(dāng)溶液中負(fù)電荷過(guò)高時(shí)會(huì)導(dǎo)致團(tuán)聚，團(tuán)聚確實(shí)會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率，且會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性增加。根據(jù)我們客戶的使用反饋，按照正常使用比例不會(huì)導(dǎo)致顆粒聚集，這也是我們產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)之一。

PEG化氧化鐵

1.?在磁性納米顆粒上接分子量約3000的肽段，選PEG化的氧化鐵合適嗎？

答：合適，PEG化四氧化三鐵比其他同類產(chǎn)品更抗吞噬，靶向性更強(qiáng)。

2.?肽段修飾在磁性納米顆粒上，復(fù)合物的水動(dòng)力尺寸還在納米級(jí)別嗎？

答：在的。

3.?小肽需要多少量？（PEG化磁性納米顆粒（羧基末端）5mg）

答：質(zhì)量比一般是Fe：小肽=1:0.5到1:1。

4.?貨期多長(zhǎng)？

答：定制一般是三個(gè)月。

裸γ-Fe2O3

1.?磁性納米材料的制備方法？

答：裸γ-Fe2O3的制備主要有兩種方法：共沉淀法和高溫?zé)峤夥ā９渤恋矸ㄊ悄壳坝脕?lái)批量生產(chǎn)磁性納米顆粒的主要方法，本實(shí)驗(yàn)室也采用此方法，其缺點(diǎn)是顆粒分散不均勻，大小不均一。高溫?zé)峤夥ㄊ悄壳氨容^熱門(mén)的一種研究方法，目前不能批量生產(chǎn)，但是顆粒均勻分布TEM照片特別漂亮。若有客戶想要高溫?zé)峤夥ǖ漠a(chǎn)品，可以提供，但是價(jià)格另算，要高很多。

細(xì)胞標(biāo)記

1.?干細(xì)胞標(biāo)記方法？

答：取納米顆粒用無(wú)血清的培養(yǎng)液稀釋成20ug/mL左右，加入細(xì)胞，30min后補(bǔ)加血清，孵育12-24h。

2.?細(xì)胞標(biāo)記有哪些檢測(cè)方法？

答：一般是MRI造影和組織切片做普魯士藍(lán)染色。

3.?連接上抗體后是用紫外測(cè)試？還是用核磁質(zhì)譜分析呢？如何驗(yàn)證連接的成功與否？

答：都可以，做紫外測(cè)試時(shí)，因?yàn)殍F的吸光度比較大，所以需要蛋白含量多一點(diǎn)，連接的多，看的也清楚，質(zhì)譜的也做，但是做的不多。要驗(yàn)證連接的成功與否，做一個(gè)純化步驟，一般有離心或者過(guò)凝膠柱等，看分離出來(lái)的鐵那部分有無(wú)蛋白，若量多的話，用紫外直接做，因?yàn)槭菧y(cè)試蛋白含量，推薦您使用BCA試劑。

4.?你們有沒(méi)連接抗體的步驟，能不能發(fā)給我們先看一下？

答：抗體連接步驟很多，一般有EDC，但是具體的連接方法還是要自己查文獻(xiàn)的。

5.?你們的納米顆粒被細(xì)胞吞噬的多？有沒(méi)有細(xì)胞毒性？應(yīng)該是吞噬的多好還是少好啊？

答：具體的吞噬多少是無(wú)法測(cè)試的，但是若用我們推薦的方法，我們可以保證細(xì)胞的標(biāo)記率達(dá)90%以上。細(xì)胞毒性是有的，但是很低，要看細(xì)胞是不是比較敏感，一般40ug/mL是沒(méi)有問(wèn)題的。若細(xì)胞吞噬的越多，毒性自然就大，但是吞噬的越多，實(shí)驗(yàn)顯現(xiàn)的效果越好，所以要選一個(gè)合適的比例。

6.?蛋白質(zhì)和磁珠的物質(zhì)的量的比是多少，畢竟我們的抗體是個(gè)單域抗體，分子量小很多。

答：我們是按質(zhì)量比來(lái)加的，F(xiàn)e跟抗體質(zhì)量比為1：1，我們的抗體分子量是150k，我們的體系里面抗體是過(guò)量的。

7.?但是我們的抗體只有15k,也照質(zhì)量加的話會(huì)不會(huì)過(guò)量太多了？

答：如果抗體分子量小的話可以按質(zhì)量Fe:抗體=10：1。

8.?在標(biāo)記之后還是要濃縮一下的，還是大概超濾下好了？

答：最好不要，你們沒(méi)有合適的濃縮手段，很容易導(dǎo)致聚集的，盡量在偶聯(lián)過(guò)程中不要把體積打的太大。

9.?Fe的最佳標(biāo)記濃度是多少？拿到產(chǎn)品要不要做什么稀釋動(dòng)作？

答：取微量鐵分散在培養(yǎng)液中，保證每ml培養(yǎng)液含20ug鐵，具體的量要根據(jù)客戶的實(shí)驗(yàn)情況而定。

10.??蛋白質(zhì)和磁珠反應(yīng)后如何分離？過(guò)柱子還是采用透析？多出來(lái)的硼酸體系要除去嗎？

答：如果穩(wěn)定的話可以過(guò)柱子，不穩(wěn)定的話適當(dāng)離心即可，硼酸體系是用來(lái)緩沖的，不必去除。

造影

1.??我們?cè)煊坝玫腗RI機(jī)型及設(shè)置參數(shù)？

答：德國(guó)siemens公司 avanto 1.5T。

2.??做磁性靶向，需要推薦納米材料？

答：油酸修飾的、PEG修飾和DMSA修飾的都可以用。但是主推PEG@Fe3O4，因?yàn)橛袡C(jī)相的不能用在動(dòng)物體內(nèi)會(huì)有毒性，DMSA@Fe3O4（制備方便）屬于水相試劑，毒性小，PEG@Fe3O4為水相溶劑，毒性小，靶向性好。

3.??注射到小鼠體內(nèi)的劑量如何才能夠不導(dǎo)致小鼠的死亡？

答：當(dāng)注射劑量按照每千克體重0.5mg鐵的量注射時(shí)，小鼠是不會(huì)死亡的。（0.5mg/kg體重是推薦劑量，就是說(shuō)這個(gè)劑量就會(huì)有效果，但是不能保證這個(gè)劑量就能夠不使得小鼠死亡，死亡的原因很多，如果注射速度過(guò)快也會(huì)導(dǎo)致死亡的）

4.??小鼠注射時(shí)是不是轉(zhuǎn)換到PBS那種中性的環(huán)境比較保險(xiǎn)呢，怕小鼠受不了。

答：中性環(huán)境的進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)容易導(dǎo)致團(tuán)聚，這個(gè)PH跟蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)關(guān)系很大，您可以試下，我們就是這樣做的，我們偶聯(lián)的如avastin或者美羅華都必須在PH9下做。

特殊性問(wèn)題?

1.?我們是用來(lái)看動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊的，按照理論，我們是不希望被腹腔內(nèi)的巨噬細(xì)胞吞噬，希望都進(jìn)入斑塊內(nèi)部？

答：若產(chǎn)品部穩(wěn)定，那被巨噬細(xì)胞吞噬的機(jī)會(huì)就會(huì)大一點(diǎn)，若產(chǎn)品穩(wěn)定的話，就比較容易進(jìn)入斑塊內(nèi)部，之前東大有做過(guò)類似這樣干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果就是進(jìn)入斑塊內(nèi)部的比較多。我們的產(chǎn)品是比較穩(wěn)定的，分散性好，最終分散在水中，這也是我們的產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)之一。

2.?小鼠腫瘤注射的注射方案

答：按鐵濃度為1mg/ml算，注射量是腫瘤體積的一半（腫瘤體積計(jì)算方式是(ab2)/2,a是指腫瘤的長(zhǎng)徑，b是指腫瘤的短徑）。值得注意的是注射需要比較細(xì)的針如胰腺灌注針進(jìn)行多靶點(diǎn)注射。

3.?CT造影用碘油納米乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

答：購(gòu)買(mǎi)后一般4度密封可長(zhǎng)期保存，也可在常溫下短期存放。這款產(chǎn)品相對(duì)比較穩(wěn)定，而且效果很好。小鼠注射量推薦量是100到200微升（碘濃度：48mg/ml），通過(guò)尾靜脈注射1到4小時(shí)內(nèi)會(huì)觀察到明顯的造影圖像。因?yàn)樵撛煊皠┍粍?dòng)靶向到肝，可設(shè)置不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的對(duì)照，比如1h，4h，8h，12h，24h等。